重點概念
- 淋巴瘤的診斷與次分類在過去三十年劇變：早期分類純以腫瘤性淋巴球的形態學為基礎，現代分類則整合免疫表型 (immunophenotypic)、基因 (genetic) 與臨床資訊，以利治療與預後判斷。
- 免疫組織化學 (immunohistochemical) 與分子技術已是診斷流程中不可或缺的一環，常規用於評估可疑的皮膚淋巴增生性病變 (cutaneous lymphoproliferations)：核心任務是鑑別反應性 (reactive) 與腫瘤性 (neoplastic)，並在確認腫瘤性後加以次分類。
次世代定序 (Next-Generation Sequencing, NGS) 的應用
- NGS 能在任意數量基因中偵測突變 (mutations)、缺失 (deletions)、插入 (insertions) 與複本數變異 (copy number alterations)。
- 在皮膚病理學中，NGS 的主要臨床應用為黑色素瘤 (melanoma)（圖 2-31；詳見第 26 章）；須在「探查基因數」與「成本與複雜度」間取得平衡。
- 融合基因 (fusion genes) 偵測：DNA 定序可提供部分資訊，但 RNA 方法為首選（敏感度更高、更穩健）。
- NGS 為廣泛探查**循環 (腫瘤) DNA（液態切片，liquid biopsies）**的首選方法，未來或可取代或補充組織型診斷。
- RNA 定序亦可測定基因表現，並可偵測 micro-noncoding RNA 與 long-noncoding RNA；敏感度可達單一細胞層級，但目前無特定臨床應用。
- NGS 同時改變了探查胚系 (germ line) DNA 變異/突變的能力；隨成本下降與生物資訊解讀可靠度提升，臨床應用日漸普及。
本節範圍
- 本節聚焦於 PCR (polymerase chain reaction) 在診斷性血液病理學的應用——目前最常用的分子技術——用於偵測抗原受體基因重組 (antigen receptor gene rearrangement)。
- 特定淋巴瘤次型的免疫表型與基因特徵詳見第 29 章。
- FISH 技術可用於顯示主要與 B 細胞淋巴瘤 (B-cell lymphomas) 相關的轉位 (translocation)。
圖 2-31：整合式基因體檢視器 (IGV) 顯示黑色素瘤中的 BRAF V600E 突變；NGS 雙向定序（正股藍、反股紅）的個別 DNA 股使變異等位基因頻率得以精確判定。
Fig. 2.31 Integrated genome viewer (IGV) depiction of a BRAF V600E mutation in melanoma. Note that the display shows individual DNA strands sequenced in both directions (forward and reverse strands, blue and red) by NGS sequencing. Thus the precise variant allele frequency can be determined.