核心概念
- 特定 DNA 區域（常含目標基因）的增加 (gains) 或喪失 (losses) 可提供診斷洞見。
- 等位基因 (allele)：特定遺傳基因座或一段 DNA 區域（如一個基因）的變異型。
- 偵測等位基因失衡 (allelic imbalance) 或雜合性喪失 (loss of heterozygosity, LOH)：可在石蠟包埋材料中偵測特定等位基因之缺失或增加，通常對應特定目標基因區域。
技術原理
- 以 PCR 擴增帶有常見多型性 (common polymorphisms) 的小型基因組片段，使個體高度可能帶有兩種不同等位基因。
- 理想上兩等位基因大小不同，便於在電泳膠 (electrophoretic gel) 上偵測；若不可行則改用 DNA 定序。
- 唯有當病人正常組織中存在兩種不同等位基因時，此技術才具資訊價值（必須是雜合子）。
- 若腫瘤組織中只測得一個等位基因，或某等位基因大量過剩（因混有正常組織），即暗示失衡（一個等位基因喪失）；更細緻分析可區分出真正的喪失 (true losses)。
- 反覆出現喪失的位點通常含腫瘤抑制基因 (tumor suppressor genes)。
臨床應用與限制
- 可偵測傳統染色體核型分析 (chromosomal karyotype analysis) 無法顯示的喪失，且可輕易應用於福馬林固定石蠟包埋 (FFPE) 組織。
- 限制一：對正常（基質 stromal）細胞污染敏感，污染量增加時難判定等位基因是否真喪失。
- 限制二：無法區分失衡是源於一個標記的喪失，抑或另一個標記的複製數增加 (copy number increase)。
補述:EB 之超微結構與分子診斷
- 已發展出針對 EB 各型標的蛋白的抗體組（多數可商業取得），使穿透式電子顯微鏡作為 EB 診斷工具的重要性下降；但超微結構分析仍有助於確認裂開平面 (plane of cleavage) 與確立某些顯性型 EB 診斷。
- 隱性型 EB：皮膚免疫標記 (skin immunolabeling) 為最重要診斷方法；特定蛋白染色減少或缺失可快速診斷並指引致病基因，再導向以 PCR 或 NGS 為基礎的分子篩檢。
- 顯性型 EB：病人皮膚免疫組化常與正常對照無法區別，故 Sanger sequencing 常作為初步診斷首選。
- 最常見型 localized EB simplex（水疱主要在手足，占所有 EB > 70%）：DNA 定序為最佳診斷法。
- EB 診斷日益採用 NGS（whole exome sequencing、selected gene panels），可用於遺傳諮詢、帶因者篩檢與 DNA 產前檢測。
- 皮膚切片優勢在時程：免疫組化可於 2 天內完成，故仍是 EB 診斷（尤其新生兒）的關鍵環節。
圖 2-21:Dowling-Meara 型單純型 EB（圖 2.17B 病例）皮膚穿透式電子顯微鏡：基底角質細胞細胞質內角蛋白絲凝聚成團塊，並於緊鄰真皮-表皮交界上方發生細胞溶解 (cytolysis)。(Bar = 1 µm.)
Fig. 2.21 Transmission electron microscopy of skin in Dowling-Meara EB simplex (case illustrated in Fig. 2.17B): within the basal keratinocyte cytoplasm the keratin filaments are condensed and form clumps and there is cytolysis that occurs just above the dermal–epidermal junction. (Bar = 1 µm.)