切片原則 (Sectioning)
- 對黑色素瘤病人 SN 的組織學檢查原則有廣泛共識，但對最佳切片與染色流程的共識有限。
- 應自 SN 每一半切多張切片，並以 H&E 及針對黑色素瘤相關抗原表位的免疫組化抗體染色；常規與免疫組化的切片張數、切片間隔仍有爭議。
UCLA 聚焦取樣流程
- 初期微轉移研究觀察到，早期黑色素瘤轉移通常位於最長淋巴結子午線旁相對狹窄的組織帶；故仔細取樣子午線旁組織應能偵測早期淋巴結轉移的次群病人。該研究中，加取更周邊區域並未增加黑色素瘤陽性淋巴結比例（與乳癌不同，乳癌腫瘤細胞在淋巴結表面分布較廣，更廣取樣會漸增陽性比例）。
- 據此一貫建議：自淋巴結兩面各切 10 張全切面連續切片，以 H&E（切片 1、3、5、10）、S100（切片 2）、HMB-45（切片 4）、MART-1（切片 6）、SOX-10（切片 7）染色；切片 7–9 保留為備用。
- 若原發黑色素瘤厚度大於 1.2 mm（顯著淋巴結轉移風險）者，初始 20 張切片未找到腫瘤細胞，可再製作加切片檢查，但作者經驗中額外評估的收穫低。
- 此法在 16–20% 的 SNB 檢體偵測到黑色素瘤；該比例隨研究納入的原發黑色素瘤厚度而異，且與廣泛切除後觀察長達 10 年病人同側區域淋巴結出現臨床可測轉移的比率非常接近。
延伸取樣與 EORTC 流程
- 近期研究報告更延伸取樣（評估自 SN 更深區域所切切片）可在部分子午線旁切片無腫瘤的病人辨識出轉移；此額外偵測之黑色素瘤細胞的臨床意義仍未知，需追蹤長達 10 年闡明其生物學。
- Cook 等人報告，檢查以 50-µm 間隔所切的六對切片、分別以 H&E 與 S100 染色，可在最多 33.8% 的 SN 偵測到黑色素瘤；各層另切備用切片以供初始結果不明時加做免疫組化。
- 此流程的修改版近期被 EORTC 採用，現為進入 EORTC 臨床試驗黑色素瘤病人 SN 評估的要求（Fig. 28.9）。
- 選擇取樣流程時，病理醫師應與外科同仁協商，在準確性與成本、工作量之間取得平衡。
圖 28-9：取樣指引（左欄 UCLA 取樣；右欄 EORTC 取樣）。UCLA 法以 H&E 與免疫組化密集取樣子午線旁組織、用三種不同敏感性與專一性的免疫標記，但不評估較周邊部位，偵測 16至20% 的前哨淋巴結之黑色素瘤；EORTC 法用 H&E 與 S100（備用切片可加做免疫標記），取樣較周邊部位，據報可偵測最多 33.8% 的前哨淋巴結，但需額外技術工作與顯著增加的病理醫師工作量。