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原理
- 免疫螢光 (immunofluorescence) 技術具有在亞細胞層級界定抗原-抗體交互作用 (antigen-antibody interactions) 的潛力。此交互作用需要將一個容易被辨識的標記物 (label) 不可逆地結合上去，以供辨認。
- 螢光染料 (fluorochromes) 如 rhodamine 或 fluorescein 即為此種標記物，能以紫外光或可見光的形式吸收輻射。
- 直接與間接免疫螢光 (direct and indirect immunofluorescence, IMF) 技術可顯示多種具皮膚病理學 (dermatopathological) 重要性的組織抗原，包括感染性與自體免疫水疱性疾病 (infectious and autoimmune blistering disorders) 的診斷。
直接與間接免疫螢光技術
- 在直接 IMF 技術中，抗體直接與螢光染料 (fluorochrome) 結合 (conjugated)，並利用紫外光顯微鏡 (ultraviolet light microscopy) 在組織切片中偵測抗原。
- 在間接 IMF 技術中，病人血清（內含抗體）與含有抗原的組織切片產生交互作用；之後再施加一種與螢光染料結合的抗人類免疫球蛋白 (anti-human immunoglobulin) 抗體。
- 要成功顯示抗原，必須使該抗原在原位 (in situ) 維持足夠的不可溶性。
檢體運送
- 供直接免疫螢光使用的皮膚切片，可置於浸泡生理食鹽水的紗布上、放在冰上的容器中以新鮮狀態運送，或置於運送介質 (transport medium) 如 Michel medium 中運送。
- 運送介質必須維持在 pH 7.0–7.2。
臨床應用與優點
- IMF 在皮膚病理學中的主要用途為解讀自體免疫水疱性疾病 (autoimmune blistering diseases)、紅斑性狼瘡 (lupus erythematosus) 與血管炎 (vasculitis)。
- 一般而言，相較於免疫組織化學 (immunohistochemistry)，免疫螢光具有下列優點：
- 對抗原的偵測更為敏感 (more sensitive detection of antigen)。
- 可使用特殊固定法 (special fixation) 來保存「困難的」抗原。免疫螢光切片的褪色 (fading) 可藉由使用抗褪色封片劑 (anti-fading mountants) 來克服。